更新時間:2022-08-18
上海恒遠(yuǎn)公司提供各種種屬、各種系列ELISA檢測試劑盒,僅限于實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究用,不適用于臨床診斷?!按笫蟾哌w移率族蛋白B1 "提供免費(fèi)代測服務(wù),詳情請您。
免費(fèi)咨詢:13636351217
本公司對所售出的產(chǎn)品提供售前售后服務(wù):
售前:()
售后:()
上海恒遠(yuǎn)生物公司提供免費(fèi)代測服務(wù),產(chǎn)品僅供科研。
產(chǎn)品名稱:大鼠高遷移率族蛋白B1
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
主要組成成分:試劑盒
性狀:液體
適應(yīng)癥:科研
貯藏:2-8℃
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
【歡迎點(diǎn)此進(jìn)入】:http://82t.com.cn