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實(shí)驗分析數(shù)據(jù)為什么容易出錯

更新時間:2013-07-03   點(diǎn)擊次數(shù):2463次

 今日,據(jù)售后客戶的反饋報告顯示,很多客戶實(shí)驗做出的分析有問題,這種現(xiàn)象曾在美國Scripps Research Institute的研究員Geoffrey Chang發(fā)現(xiàn)過,他用來分析實(shí)驗數(shù)據(jù)的程序發(fā)生錯誤,因此只能發(fā)表聲明撤回五篇已發(fā)表的論文,包含三篇發(fā)表在Science上的論文。

 事情發(fā)生在2006年九月,一名瑞士的研究員在Nature上質(zhì)疑Geoffrey Chang在2001年發(fā)表于Science上的一個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有問題。結(jié)果仔細(xì)檢查后竟然發(fā)現(xiàn),他的團(tuán)隊所寫的用來分析實(shí)驗數(shù)據(jù)的程序?qū)尚袛?shù)據(jù)的符號顛倒了,結(jié)果將他團(tuán)隊用來決定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的電子密度顛倒了過來。因此就這么得到了錯誤的結(jié)果。不過錯誤的結(jié)果導(dǎo)出了一個看起來依舊合理的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),所以這個錯誤才沒有被發(fā)現(xiàn)。之后,不知情的研究人員繼續(xù)利用這一套軟件分析之后的實(shí)驗數(shù)據(jù),導(dǎo)致了整起事件。
 
    在研究室中,市面上所販賣的套裝商業(yè)軟件往往需要使用者額外增加一些指令以協(xié)助研究人員分析數(shù)據(jù)。但是很可能這些額外寫出的程序會含有一些很不容易看出來的小BUG,然后運(yùn)算的結(jié)果照樣給你一個看起來合理的結(jié)果。如果不仔細(xì)確認(rèn)所有的環(huán)節(jié),就會造成上述的悲慘結(jié)果。
 
    由此可知,不論是實(shí)驗或撰寫程序,研究人員皆要小心為上,確認(rèn)任何一個環(huán)節(jié)都是無懈可擊。

對此我司現(xiàn)公布實(shí)驗試劑導(dǎo)致產(chǎn)品檢驗質(zhì)量有可能出現(xiàn)的一些問題:

ELISA質(zhì)量保證是一個復(fù)雜的過程,許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量:

一、方法學(xué)的影響

ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。

二、試劑因素

不 同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條 件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng) 小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2、實(shí)驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

三、樣本因素

標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

將 抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合 的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對 不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附 力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。

不易吸附 在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。 可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包 被,也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于 各種抗原物質(zhì)的定量測定。
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