胎牛血清在科研市場(chǎng)上應(yīng)用廣泛,但對(duì)于胎牛血清的使用及保存,有一部分人可能不是很清楚,下面恒遠(yuǎn)生物把胎牛血清的儲(chǔ)存、常見(jiàn)問(wèn)題以及處理方法分享給大家。
一、不使產(chǎn)品質(zhì)量受損的儲(chǔ)存和解凍血清
未拆封的血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至合適大小的無(wú)菌離心管內(nèi),再放回冷凍。將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過(guò)水浴鍋促使其溶解。
注:融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。溶解后建議盡快使用,若長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。
二、血清中的絮狀沉淀是什么應(yīng)該如何處理
1.將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過(guò)夜。
2.待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2~3小時(shí)。
3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右。
4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。
三、如何處理解凍后出現(xiàn)的絮狀沉淀物
1.胎牛血清中沉淀物出現(xiàn)的原因有許多種,但普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后,也會(huì)存在于胎牛血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。(這些絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本身的質(zhì)量。)
2.若想去除這些絮狀沉淀物,可將胎牛血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。(不建議以過(guò)濾的方式去除絮狀沉淀物,會(huì)有阻塞過(guò)濾膜的可能)。
3.解凍胎牛血清時(shí),按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。(解凍時(shí)均勻搖晃胎牛血清,減少沉淀的發(fā)生)。
4.請(qǐng)勿將胎牛血清置于37℃太久,因?yàn)闀?huì)導(dǎo)致胎牛血清變得混濁,同時(shí)胎牛血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)受到損害,影響胎牛血清的質(zhì)量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,即無(wú)須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。
四、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀
1.解凍時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一。
2.分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(勿造成氣泡)。
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍,較大的溫差,易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
4.切勿將血清置于37℃過(guò)長(zhǎng)時(shí)間,否則可能使之渾濁,其中一些不穩(wěn)定的組分也會(huì)因此受到影響,終降低血清的品質(zhì)。
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,即無(wú)須做此步驟。
6.若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且保持搖晃均勻。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。