細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是: 因該類樣本干擾因素較多, 如細胞狀態(tài)、 細胞數(shù)量(大于 10^6)、ph(約為 7)、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
如果目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本,如果目的物主要存在于胞內(nèi),則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單,取細胞培養(yǎng)上清,1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測。
細胞裂解液:
1)貼壁細胞需要先用胰酶消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集) ;
2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3次;
3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復(fù)凍融) :
⇒ 超聲破碎:取適量PBS 重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂;
⇒ 反復(fù)凍融:將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)3次,使細胞溶脹破碎;
4)將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,收集上清備用。
處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應(yīng)小于 1 周,-20 度不應(yīng)超過 1 個月,-80度不應(yīng)超過2個月。在標本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的第yi步, ,以上就是關(guān)于常見樣本處理方法的一個簡述,供研究者參考。