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胚珠培養(yǎng):
概念:在無菌條件下對(duì)授粉的子房取出胚珠進(jìn)行培養(yǎng)的過程。有時(shí)也把胚珠連同胎座一起取下來培養(yǎng)。
優(yōu)點(diǎn):胚珠培養(yǎng)可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養(yǎng)的問題。另一方面在未受精的胚珠培養(yǎng)中,可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體,用于單倍體育種。
接種和培養(yǎng)基:從花中取出子房進(jìn)行表面消毒,在無菌條件下進(jìn)行解剖,取出胚珠,放在培養(yǎng)基上培養(yǎng);多用Nistch培養(yǎng)基,也可采用MS、N6、B5等培養(yǎng)基。
注意:關(guān)鍵是選擇胚的發(fā)育時(shí)期,實(shí)驗(yàn)證明發(fā)育到球形胚期的胚珠較易培養(yǎng)成功。另外可取用帶胎座甚至帶部分子房的胚珠進(jìn)行培養(yǎng)。
胚乳培養(yǎng):
概念:指對(duì)由兩個(gè)單倍的極核和一個(gè)單倍的精子結(jié)合而成的三倍體組織的培養(yǎng)??色@得無子結(jié)實(shí)的三倍體植株,進(jìn)而可將它加倍成六倍體植株。
接種和培養(yǎng)基 :取授粉4~8天后的幼果,常規(guī)消毒后,在無菌條件下切開果實(shí),取出種子,小心分離出胚乳。接種在培養(yǎng)基上;
培養(yǎng)過程:
I)接入MS、White等培養(yǎng)基,附加2,4-D或NAA 0.5~2.0,BA0.1~1.0。在25~27度和黑暗條件或散射光下培養(yǎng),約6-10天胚乳開始膨大,形成愈傷組織;
II)轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基,MS培養(yǎng)基附加0.5~3.0 mg/l的BA及少量的NAA。使愈傷組織長(zhǎng)出芽。
III)切下不定芽,插入生根培養(yǎng)基中,光下培養(yǎng)10~15天,切口處可長(zhǎng)出白色的不定根。
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