上周青島農(nóng)業(yè)大學徐老師在我公司購買了相應的抗體自己包被Elisa試劑盒。由于徐老師是位實驗新手,剛剛接觸Elisa實驗,研究大鼠干擾素相關指標的實驗,做完大鼠γ干擾素Elisa實驗后反應標準曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應后測得的值梯度就沒有了。
為此,我公司技術員對Elisa標準曲線做不好的原因做出分析:
1.剛加完顯色劑時梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2.酶濃度太高,導致zui后顯色結(jié)果都是高的。
3.包被-酶標系統(tǒng)不匹配或者酶標的非特異反應太強,或者酶標儀讀數(shù)范圍不夠。
4.樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。
5.建議:包被、酶標重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍
6.有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。
7.蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
8.酶是自己標的這種情況的,HRP比例不要太高。
問題解決后,徐老師對我公司試劑盒的售后服務非常滿意,并表示下學期會有新的實驗課題,直接買我公司的進口品牌Elisa試劑盒。非常感謝青島農(nóng)業(yè)大學徐老師對上海恒遠生物科技有限公司的支持與信賴。